Exp?Hematol Oncol?| 張錚/黃亮/Vijay?Bhoj團隊開發(fā)雙功能BiTE細胞外囊泡治療B細胞惡性腫瘤

嵌合抗原受體T細胞（CAR-T）和雙特異性T細胞銜接器（BiTE）顯著改善了復發(fā)或難治性B細胞惡性腫瘤的治療結(jié)局。然而，CAR-T細胞治療存在制備復雜、成本較高等問題；以blinatumomab為代表的游離BiTE分子體內(nèi)半衰期較短，通常需要持續(xù)靜脈輸注。此外，免疫抑制性腫瘤微環(huán)境也會限制T細胞浸潤和活化。

近日，中國醫(yī)學科學院血液病醫(yī)院、華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院及美國賓夕法尼亞大學等單位，在Experimental Hematology & Oncology發(fā)表題為 Engineered extracellular vesicles displaying bi-specific T-cell engagers for targeted therapy of B-cell malignancies的研究論文。該研究構(gòu)建了雙功能細胞外囊泡平臺BiTEEV@STA。BiTE通常由兩個單鏈可變片段組成，一端識別腫瘤細胞表面抗原，另一端結(jié)合T細胞表面的CD3分子，從而建立腫瘤細胞與T細胞之間的連接，誘導T細胞活化并清除靶細胞。

研究團隊將CD19×CD3 BiTE通過跨膜結(jié)構(gòu)錨定于細胞外囊泡表面，構(gòu)建BiTE EV。該設計使囊泡表面可同時展示多個BiTE分子，兼具識別CD19?腫瘤細胞和募集CD3? T細胞的能力，從而促進抗原依賴性的T細胞活化與腫瘤細胞殺傷。

圖1：BiTE EV@STA通過CD19×CD3雙抗重定向T細胞，并遞送STING激動劑激活樹突狀細胞和巨噬細胞，協(xié)同增強抗腫瘤免疫。

透射電子顯微鏡及納米顆粒跟蹤分析顯示，工程化BiTE EV保持了完整的囊泡結(jié)構(gòu)和相對均一的粒徑。流式細胞術和共聚焦成像進一步證實，BiTE EV能夠同時結(jié)合CD19和CD3，并優(yōu)先與CD19?腫瘤細胞及T細胞發(fā)生相互作用。

藥代動力學研究顯示，BiTE EV在小鼠體內(nèi)的消除半衰期約為10.7小時，明顯長于游離BiTE的3.9小時，提示細胞外囊泡表面展示能夠改善BiTE分子的體內(nèi)暴露時間。

進一步研究顯示，BiTE EV可激活ZAP-70、AKT和ERK等T細胞受體下游信號，促進CD69和CD25表達，并誘導IFN-γ和TNF-α釋放。在體外共培養(yǎng)體系中，BiTE EV能夠有效清除CD19? Raji和Nalm6腫瘤細胞，而對CD19敲除細胞的殺傷作用明顯下降，證明其效應具有抗原依賴性。

在Nalm6白血病異種移植模型中，BiTE EV顯著抑制腫瘤進展并延長小鼠生存期。較高頻率給藥組的腫瘤負荷較對照組下降超過90%，并伴隨外周血T細胞擴增以及骨髓和脾臟中T細胞活化增強。

為進一步克服免疫抑制性腫瘤微環(huán)境，研究團隊通過電穿孔將STING激動劑ADU-S100負載至BiTE EV內(nèi)部，構(gòu)建BiTE EV@STA。STING激活能夠促進I型干擾素和趨化因子產(chǎn)生，推動樹突狀細胞成熟、巨噬細胞活化及T細胞向腫瘤組織浸潤。

體外實驗顯示，負載STING激動劑的細胞外囊泡能夠激活IRF3信號，上調(diào)IFN-β和CXCL10，并促進樹突狀細胞和巨噬細胞表達共刺激分子CD86。

在Raji淋巴瘤模型中，BiTE EV@STA表現(xiàn)出優(yōu)于BiTE EV或游離STING激動劑的抗腫瘤效果，并顯著增加腫瘤內(nèi)CD8? T細胞浸潤。轉(zhuǎn)錄組及免疫學分析顯示，該治療增強了抗原呈遞和I型干擾素相關通路，同時促進CD86?巨噬細胞及成熟樹突狀細胞增加。

安全性評價顯示，在本研究采用的劑量和觀察時間內(nèi)，BiTE EV及BiTE EV@STA未引起明顯體重下降、肝腎功能異常或主要臟器組織損傷。

綜上，該研究開發(fā)了一種兼具表面蛋白展示和內(nèi)部藥物負載能力的雙功能細胞外囊泡平臺。BiTE EV通過CD19×CD3雙抗募集并激活細胞毒性T細胞，STING激動劑則進一步促進樹突狀細胞成熟、巨噬細胞活化和CD8? T細胞腫瘤浸潤，從而實現(xiàn)先天免疫與適應性免疫的協(xié)同激活。

該平臺目前仍處于臨床前研究階段，但為B細胞惡性腫瘤的組合免疫治療提供了新的思路，也展現(xiàn)了工程化細胞外囊泡作為模塊化免疫治療平臺的應用潛力。

楊秀秀、許謙和王玨為本文共同第一作者，張錚、黃亮和Vijay G. Bhoj為共同通訊作者。

原文鏈接：https://link.springer.com/article/10.1186/s40164-026-00749-5

制版人：十一

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